天津医科大学硕士研究生论文    

        指导教师:张云山教授

  卵巢早衰POF指青春期后、40周岁前的非生理性闭经，患病率为1%-3%，而2%-10%的继发性闭经患者属于POF。本病具体病因至今未明，但医源性因素引起卵巢损伤致衰竭的情况较明确，近年来关注度很大。 尤其是接受化疗的年轻恶性肿瘤患者，生殖系统不可逆的损伤给生活质量带来巨大影响，如何恢复这部分患者内分泌以及生育能力引起科学家们广泛关注。大量研究显示，卵巢卵泡微环境内存在氧化与抗氧化动态平衡，具体表现为卵泡液内高浓度表达酶性抗氧化剂(如SOD、CAT等)和非酶性抗氧化剂(如VC、亚牛磺酸 等)，这种动态平衡与卵泡成熟密切相关。氢气是一种无色无味的双原子分子气体，具有一定还原性，对缺血再灌注损伤、脓毒症、低雌激素导致的骨质疏松都 有一定保护作用。本实验采用环磷酰胺(CTX)作为诱发大鼠卵 巢损伤药物,探讨饱和氢盐水对化疗所致大鼠卵巢损伤的影响,为其临床应用寻 求理论依据。

方法:

将实验动物随机分为5组: Con组:不予任何处理；Con+H2组:给予大鼠每日早晚8点2次腹腔注射饱和氢盐水10 ml/kg；OI组:腹腔注射CTX溶液复制化疗致卵巢损伤模型，CTX给药方案为首日负荷量50 mg/kg,随后以每日8 mg/kg的维持量持续14 d；OI+0.6H2组:CTX腹腔注射方案同OI组，但CTX 给予维持量同时每日早晚8点2次腹腔注射饱和氢盐水10 ml/kg；OI+0.3H2组: CTX腹腔注射方案同0I组,但在给予CTX维持量同时每日早晚8点2次腹腔注射0.3mmol/L的氢盐水10 ml/kg。于停药后第1日(即15 d)、第16日(即30 d) 和第31日(即45 d)分批处死大鼠,留取卵巢固定,HE染色观察卵巢病理:外周血离心取血清,检测卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、丙二醛(MDA)的变化情况;提取卵巢蛋白质检测SOD、 CAT、MDA变化情况以及Nrf2表达情况。

结果:

与Con组相比，腹腔注射CTX15d、30d、45d诱发性激素发生明显变化, 具体表现为FSH水平增加，E2水平降低；氢盐水处理,能改善卵巢损伤大鼠性 激素的异常表达，且呈浓度依赖性。CTX注射后诱发卵巢病理变化和氧化.还原系统失衡，血清和卵巢组织氧化产物MDA增加、抗氧化酶CAT和SOD活性降低；而给予饱和氢盐水处理后,可以明显改善卵巢损伤大鼠组织学变化以及血清 和卵巢组织的氧化产物MDA产生和抗氧化酶CAT和SOD活性，具体表现为氧化产物MDA减少和抗氧化酶CAT和SOD活性增加。卵巢损伤大鼠的卵巢Nrf2 表达增加，而氢气能进一步增加Nrf2表达，使Nrf2下游的抗氧化酶表达增加。

 

结论:

饱和氢盐水能显著改善化疗药物诱发的卵巢组织氧化损伤，且呈浓度依赖性; 能改善受损卵巢组织的激素表达和病理表现；可以减少氧化产物MDA的产生，同时增强抗氧化酶CAT、SOD活性；进一步增强Nrf2表达，这可能与激活内源性抗氧化系统keapl-Nrf2.ARE有关。

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